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第12章 发现（第2页）

实验的执行

实验前的最后检查：在实验开始之前，陈文同志进行了最后的检查，确保所有设备正常运行，包括显微镜、pcr仪、电穿孔设备和细胞培养箱。

他检查了所有试剂的质量和浓度，包括grna、cas9蛋白和供体dna。

细胞培养：陈文同志从培养箱中取出了准备好的人类细胞样本。

这些细胞在实验前经过了精心的培养和筛选，以确保它们的健康和活力。

crispr-cas9复合体的制备：他将设计好的grna与cas9蛋白混合，形成了crispr-cas9复合体。

这个复合体将作为基因编辑的“剪刀”

，精确地切割目标dna序列。

电穿孔转染：陈文同志将crispr-cas9复合体和供体dna一起加入到细胞悬液中。

他使用电穿孔设备对细胞进行转染，以确保crispr-cas9复合体和供体dna能够高效地进入细胞内部。

孵育和观察：转染后的细胞被放回培养箱中孵育。

陈文同志密切观察细胞的状态，确保它们在适宜的温度和ph值下生长。

荧光显微镜检查：数小时后，陈文同志使用荧光显微镜检查细胞。

他寻找那些成功整合了耐辐射基因的细胞，这些细胞会显示出特定的荧光标记。

数据记录和分析：陈文同志记录了所有观察到的现象，包括荧光强度和分布模式。

他使用这些数据来评估基因编辑的效率和效果。

实时pcr和基因测序：为了进一步确认耐辐射基因的整合和表达，陈文同志进行了实时pcr和基因测序。

这些技术可以精确地检测基因编辑后的细胞中耐辐射基因的存在和表达水平。

实验结果的评估：在收集了所有数据后，陈文同志评估了实验结果。

他分析了基因编辑的效率、耐辐射基因的表达水平以及任何可能的脱靶效应。

后续实验的规划：基于实验结果，陈文同志规划了后续实验，以进一步优化基因编辑过程和提高成功率。

他想到了可能的改进措施，包括调整grna设计、cas9蛋白的浓度和转染条件。

实验的确认

进入了实验的确认阶段，这一阶段对于验证实验的成功与否至关重要。

实时pcr验证：首先，陈文同志使用实时pcr技术来验证耐辐射基因是否已经成功整合到人类细胞的基因组中。

他设计了特定的引物，这些引物能够特异性地扩增耐辐射基因的序列。

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